云南分离纯化择优推荐「多图」

色谱柱是HPLC系统非常关键的一部分，随着色谱技术的发展，它也不断地更新换代，长度变得越来越短，填料颗粒也越来越细。现在常用的色谱柱长度在30～250 mm，颗粒直径在1.6～5μm。颗粒类型主要有全多孔和表面多孔，全多孔填料具有更大的柱容量、更多键合相选择的优点，表面多孔具有反压低、峰形好的优点。的基质是硅胶。以前填料纯化技术不是很成熟，十八烷基键合到硅胶表面不是很完全，硅胶上总是少量的硅羟基在外面。这样就造成样品在进行色谱分离的时候，会吸附或者键合在这部分硅羟基上，导致色谱峰拖尾。(2)样品的前处理：制备色谱柱子由于处理的样品多，比分析柱子更容易受污染，所以，必要的前处理就显得非常的必要。使用三乙胺作为封尾剂，与硅羟基吸附，可以使峰型改善，这个三乙胺曾经一度成为分析界的宝贝和。现在，制造填料的技术日趋成熟，人们已经掌握了把这部分剩余未键合硅胶也进行键合钝化的技术，这个技术就叫作封尾。

液相色谱仪的常规操作及维修：　　1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。　　2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。　　3、打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。　　4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。　　5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。　　6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。　　7、设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a、进样前的稳流，一般2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject转换；d、走样时间，随不同的样品而不同。　　8、进样和进样后操作。（具体的插入程度和方法参见所使用GC的随机手册）避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击trun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。　　9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。

制备液相色谱仪可以满足常规实验室纯化制备，并可根据使用需要，搭配紫外检测器组成等度系统,高压二元梯度系统，实现实验室制备提取。广泛用于制药、化工、食品、生化，环保等领域。

　　制备液相色谱仪原理：制备液相色谱是指采用液相色谱技术制备纯物质，即分离、收集一种或多种色谱纯物质。制备液相色谱中的“制备”这一概念指获得足够量的单一化合物，以满足研究和其它用途。制备液相色谱的出现，使液相色谱技术与经济利益建立了联系。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。制备量大小和成本高低是制备液相色谱的两个重要指标。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。快速色谱使用的柱子一般是玻璃柱，柱直径为3～10cm．长度为7～15cm。也称现代液相色谱。

HPLC的特点和优点

HPLC有以下特点：

高压—压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米为75 Kg/cm2以上。

高速—流速为0.1~10.0 ml/min。

—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。